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文章摘要
引用本文:罗轶奇,李娟玲,刘国民,成善汉,潘学峰,翟丽艳.与苦丁茶冬青雄性性状连锁的RAPD标记[J].热带生物学报,2012,3(3):208-215.
与苦丁茶冬青雄性性状连锁的RAPD标记
RAPD Markers Linked to the Male Character of Ilex kudingcha C. J. Tseng
  
DOI:
中文关键词: 苦丁茶冬青  RAPD标记  优化  性别鉴定
英文关键词: Ilex kudingcha C. J. Tseng  RAPD marker  optimization  sex identification
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39860048);海南省自然科学基金项目(311035)
作者单位
罗轶奇 海南大学 苦丁茶研究所海南 海口 570228 
李娟玲 海南大学 苦丁茶研究所海南 海口 570228 
刘国民 海南大学 苦丁茶研究所海南 海口 570228 
成善汉 海南大学 苦丁茶研究所海南 海口 570228 
潘学峰 海南大学 苦丁茶研究所海南 海口 570228 
翟丽艳 海南大学 苦丁茶研究所海南 海口 570228 
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中文摘要:
      通过正交试验设计对影响苦丁茶冬青RAPD PCR反应的5种因素4水平进行优化试验,最终确定苦丁茶冬青RAPD PCR的最佳反应体系为:在25 μL反应体系中,DNA模板20 ng,Mg2+2.5 mmol·L-1,引物浓度为0.3 μmol·L-1,Taq聚合酶浓度为2.0 U, dNTPs浓度为200 μmol·L-1。最佳的RAPD PCR扩增程序为:94 ℃ 预变性5 min,然后94 ℃ 变性30 s,36 ℃ 退火30 s,72 ℃ 延伸120 s,进行40个循环,最后72 ℃ 延伸10 min;4 ℃ 保存。然后通过RAPD技术筛选了91条随机引物,共计有24条引物能在雌/雄DNA/样品池间显示多态性,其中引物S164和S191分别扩增得到2个雄性特异标记S164-900和S191-800。经多次重复实验,RAPD标记均能在雄性个体中稳定出现,故此标记可应用于苦丁茶冬青性别的早期鉴定。
英文摘要:
      An orthogonal design was made to optimize RAPD PCR amplification system of Ilex kudingcha in 5 factors (DNA template, Mg2+, primer, dNTPs, Taq polymerase) at 4 levels, respectively. Through comprehensive analysis, an optimized RAPD PCR reaction system, was established: 10×buffer 2.5 μL, 20 ng DNA template, 2.5 mmol·L-1 Mg2+, 0.3 μmol·L-1 primers, 2.0 U Taq polymerase, and 200 μmol·L-1 dNTPs in the 25 μL reaction system, and the optimized RAPD PCR amplification program: predenaturing at 94 ℃ for 5 min, then denaturing at 94 ℃ for 30 s, elongation at 36 ℃ for 30 s and extension at 72 ℃ for 120 s, running for 40 cycles, and final extension at 72 ℃ for 10 min. The products were stored at 4 ℃. Furthermore, a total number of 91 random primers were screened in the RAPD PCR. Polymorphic fragments were detected with 24 primers in female and male DNA samples pools. Two male associated fragments (S164 900 and S191 800) were respectively generated with S164 primer and S191 primer. Repeated experiments indicated that these RAPD markers appeared stably in male individuals. So these RAPD markers can be applied to identify the sex of the young plantlets of Ilex kudingcha C. J. Tseng at the early stage.
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